什么是相差顯微鏡?

活細胞和未染色的生物標本，因細胞各部細微結構的折射率和厚度的不同，光波通過(guò)時(shí)，波長(cháng)和振幅并不發(fā)生變化，僅相位發(fā)生變化(振幅差)，這種振幅差人眼無(wú)法觀(guān)察。而相差顯微鏡通過(guò)改變這種相位差，并利用光的衍射和干涉現象，把相差變?yōu)檎穹�差�?lái)觀(guān)察活細胞和未染色的標本。相差顯微鏡和普通顯微鏡的區別是:用環(huán)狀光闌代替可變光闌， 用帶相板的物鏡代替普通物鏡，并帶有一個(gè)合軸用的望遠鏡。

相差顯微鏡具有兩個(gè)其它顯微鏡所不具有的功能:
①將直射的光(視野中背景光)與經(jīng)物體衍射的光分開(kāi);
②將大約一半的波長(cháng)從相位中除去，使之不能發(fā)生相互作用，從而引起強度的變化。

相差顯微鏡最大的特點(diǎn)是可以觀(guān)察未經(jīng)染色的標本和活細胞。

相差顯微鏡的基本原理是，利用物體不同結構成分之間的折射率和厚度的差別，把通過(guò)物體不同部分的光程差轉變?yōu)檎穹�（光強度）的差別，經(jīng)過(guò)帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實(shí)現觀(guān)測的顯微鏡。主要用于觀(guān)察活細胞或不染色的組織切片，有時(shí)也可用于觀(guān)察缺少反差的染色樣品。

把透過(guò)標本的可見(jiàn)光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見(jiàn)。光線(xiàn)透過(guò)標本后發(fā)生折射，偏離了原來(lái)的光路，同時(shí)被延遲了1/4λ（波長(cháng)），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減下，提高反差。

在構造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處：
1.環(huán)形光闌（annular diaphragm） 位于光源與聚光器之間，作用是使透過(guò)聚光器的光線(xiàn)形成空心光錐，焦聚到標本上。
2.相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種：
1.A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸后光波相加，振幅加大，標本結構比周?chē)�介質(zhì)更加變亮，形成亮反差（或稱(chēng)負反差）。
2.B+相板：將衍射光推遲1/4λ，兩組光線(xiàn)合軸后光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱(chēng)正反差），結構比周?chē)�介質(zhì)更加變暗。